自噬在不同年龄大鼠终板软骨中的变化

摘要

目的观察不同月龄SD大鼠终板软骨中自噬的变化及其意义。方法取3、6、12月龄SD大鼠的原代终板软骨细胞,分为自然培养组和雷帕霉素组。茜素红染色观察细胞形态,实时聚合酶链反应和免疫印迹检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、SOX-9、蛋白多糖转录因子和基质分解酶相关基因MMP-13以及自噬相关基因Beclin-1和LC3基因的表达,单丹磺酰戊二胺（MDC）染色观察细胞的自噬率,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞存活率。结果茜素红染色显示细胞呈梭形改变,蛋白多糖转录因子、Sox-9和Ⅱ型胶原基因表达呈年龄依赖性降低趋势（P＜0.05）,提示随年龄增长,终板软骨细胞出现退变;自噬相关基因Beclin-1和LC3在各组终板软骨细胞中均有表达,且呈年龄依赖性降低趋势[（1.0±0.1）比（0.6±0.1）,（1.0±0.1）比（0.3±0.2）;（1.0±0.2）比（0.4±0.1）,（1.0±0.2）比（0.1±0.1）]（P＜0.05）,自噬发生率也呈现明显降低（P＜0.05）。自然培养组中,细胞存活率呈逐渐降低趋势（P＜0.05）;与自然培养组相比,雷帕霉素组中各组细胞存活率明显增加（P＜0.05）。结论自然增龄大鼠中,终板软骨细胞逐渐出现退变,且存活率降低;上调其自噬水平,可提高细胞存活率,提示呈年龄依赖性降低的自噬活性,可能与椎间盘的自然退变有关。