α受体依赖的雌二醇对大鼠结肠平滑肌细胞SK3表达的影响

摘要

目的探讨17β-雌二醇对大鼠结肠平滑肌细胞（SMC）表达小电导钙激活钾通道3（SK3）的影响及其机制。方法酶解法分离SD雄性成年大鼠结肠SMC,进行原代培养。细胞免疫荧光双标观察SK3与α-肌动蛋白共表达。取2~3代SMC,不同浓度和不同时间17β-雌二醇刺激后、以反转录实时荧光定量（qRT）-PCR、Western印迹检测SMC表达SK3情况;观察雌激素受体阻断剂ICI182780在17β-雌二醇影响SK3表达中的作用及牛血清白蛋白结合的17β-雌二醇（BSA-E2）、α受体激动剂PPT及β受体激动剂DPN对SK3表达的影响。结果细胞免疫荧光双标法发现大鼠结肠SMC存在SK3与α-肌动蛋白共表达。不同浓度17β-雌二醇（10、50 nmol/L）刺激结肠SMC后SK3蛋白和mRNA表达量均显著高于溶剂对照组（0.217±0.030、0.321±0.077比0.103±0.063,1.872±0.606、2.967±0.659比0.813±0.202,均P＜0.05）,50 nmol/L为体外最大有效浓度;SK3表达的高峰时间为第12和24小时（蛋白表达量分别是0 h组的2.91、3.30倍,mRNA表达量分别为3.46、3.37倍,均P＜0.05）。予ICI 182780预处理后加17β-雌二醇,SK3蛋白表达低于17β-雌二醇组（0.111±0.050比0.351±0.084,P＜0.05）,而与对照组差异无统计学意义;BSA-E2对SK3的表达无影响。α受体激动剂PPT组SK3蛋白表达与17β-雌二醇组均显著高于对照组（0.270±0.071、0.309±0.052比0.087±0.018,均P＜0.05）;β受体激动剂DPN对SK3蛋白表达无影响。结论大鼠结肠SMC上存在SK3,17β-雌二醇可促进SK3表达,该作用由α受体介导。