IL–1β诱导的miR–425表达上调对胃癌细胞生长的影响

摘要

目的探讨白细胞介素1β（IL–1β）促进胃癌细胞生长的机制。方法采用芯片筛选IL–1β处理后人胃癌细胞系（AGS）细胞中差异表达的miRNAs;应用生物信息学手段及双荧光素酶报告系统筛选并验证miR–425的靶基因;CCK–8检测细胞增殖率;流式细胞仪检测细胞的凋亡;实时聚合酶链反应（Real–time PCR）检测临床样本及细胞中miR–425的表达。结果 （1）IL–1β处理AGS细胞后,29个miRNAs表达上调,17个miRNAs表达下调。其中miR–425在IL–1β处理后表达上调最明显。Real–time PCR结果显示,相比癌旁组织,miR–425在胃癌组织中表达显著上调（均值1.41与5.81,P＆0.000 1）;（2）使用生物信息学方法miRecords预测miR–425的潜在靶基因,经双荧光素酶报告检测,证实PTEN是miR–425的直接靶标;（3）使用核因子（NF）–κB单克隆抗体对AGS细胞行染色质免疫沉淀,证实NF–κB蛋白与miR–425的启动子中形成了复合物。荧光素酶报告基因的结果显示:miR–425启动子上B结合位点是IL–1β诱导miR–425转录激活必需的;（4）IL–1β诱导的miR–425表达上调促进细胞的增殖,抑制细胞凋亡。结论 IL–1β通过激活NF–κB诱导miR–425表达上调,负性调控PTEN进而促进胃癌细胞的增殖和抗凋亡作用。