羊种布氏杆菌基因外重复回文序列经Toll样受体9诱导IFN－α表达的研究

摘要

目的筛选具有活化Toll样受体9（TLR9）活性的羊种布氏杆菌DNA中基因外重复回文序列（REPs）, 检测其经TLR9诱导的干扰素-α（IFN-α）表达, 为羊种布氏杆菌病的防治提供新思路。方法针对羊种布氏杆菌Brucella melitensis NI基因组序列, 利用生物信息学技术识别其REPs后, 合成序列。将合成的天然骨架脱氧寡核苷酸（ODNs）转染小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7, 酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测IFN-α的分泌水平。采用TLR9-siRNA沉默RAW264.7中的TLR9, 将上述诱导IFN-α分泌增加的阳性ODN序列转染RAW264.7, ELISA方法检测IFN-α的分泌变化。结果筛选获得2 200个羊种布氏杆菌基因组REPs, 选择二级茎环结构较好的12条ODNs序列进行合成, ELISA结果显示, ODNs M2、M3、M4、M5、M6、M7、M9、M12介导IFN-α分泌量分别为（26.944 ± 1.868）、（46.461 ± 2.562）、（34.980 ± 2.055）、（43.016 ± 2.162）、（62.533 ± 4.031）、（67.125 ± 5.069）、（18.908 ± 1.633）、（39.572 ± 2.465） pg/ml, 显著高于阴性对照组的（12.594 ± 1.338） pg/ml, 差异有统计学意义（t=10.817、20.295、15.812、20.724、20.365、18.016、5.180、16.660, 均P＆0.05）, 且阳性ODN M6所介导的IFN-α分泌可以被TLR9-siRNA显著抑制。结论羊种布氏杆菌基因组REPs可经TLR9信号通路引起炎性因子IFN-α分泌增加, 参与介导羊种布氏杆菌早期感染后的固有免疫应答。