脂肪因子chemerin对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响

摘要

目的探讨脂肪因子chemerin对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响及可能机制。方法制备小鼠chemerin过表达及RNA干扰重组慢病毒, 感染3T3-L1细胞。实验设chemerin基因沉默组、沉默空载体对照组、过表达组、过表达空载体对照组。另在细胞增殖实验中增设细胞外信号调节激酶（ERK）阻断剂组。应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法联合5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入法观察chemerin对3T3-L1细胞增殖的影响;实时定量PCR检测chemerin、ERK1/2及细胞周期蛋白（cyclin）D1基因mRNA表达;Western印迹法检测chemerin、ERK1/2及磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白水平。结果 MTT及BrdU掺入实验结果显示:与过表达对照组相比chemerin过表达后吸光度（A）值升高（1.09±0.08比0.90±0.09, P＆0.05）, BrdU掺入量增加[（126.5±14.6）%比（100.0±7.0）%, P＆0.05], 此效应可被ERK1/2信号通路阻滞剂PD98059抑制, A值（0.91±0.13）及BrdU掺入量（104.3±10.7）%降低, 与过表达组相比差异均有统计学意义（均P＆0.05）;与沉默对照组相比, chemerin基因沉默后A值降低（0.72±0.11比0.90±0.09, P＆0.05）, BrdU掺入量减少[（77.6±11.8）%比（99.7±6.3）%, P＆0.05];实时定量PCR结果显示:chemerin过表达后与其空载对照组相比chemerin、ERK1/2、cyclinD1表达上调（2.77±0.31比1.01±0.12, 1.39±0.19比0.76±0.30, 1.46±0.14比0.88±0.14, 1.44±0.17比1.03±0.15, 均P＆0.05）;chemerin基因沉默后均表达下调（0.35±0.12比1.25±0.31, 0.64±0.15比1.03±0.14, 0.56±0.10比1.06±0.29, 0.66±0.13比1.09±0.19, 均P＆0.05）;Western印迹结果显示:chemerin过表达后与其空载对照组相比chemerin、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平增加（2.18±0.32比1.18±0.14, 1.37±0.05比0.97±0.12, 1.06±0.09比0.56±0.08, 均P＆0.05）, chemerin基因沉默后与其对照组相比chemerin、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白水平降低（1.00±0.07比1.40±0.17, 0.87±0.15比1.20±0.12, 0.49±0.07比0.91±0.11, 均P＆0.05）。结论 chemerin可促进3T3-L1前脂肪细胞增殖, 其机制可能是通过上调ERK1/2信号通路实现。