调控转录因子NF-κB信号通路对体外自然退变终板软骨细胞的影响

摘要

目的探讨终板软骨细胞体外自然退变模型中转录因子（NF）-κB信号通路表达变化及意义。方法分离获取大鼠终板软骨细胞,体外培养建立终板软骨细胞自然退变模型。根据细胞传代次数分P2代细胞（空白对照组）,P5代细胞（体外自然退变组）及NF-κB信号通路抑制组（细胞传代中加入Bay11-7082的P5代细胞）。观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色鉴定细胞表型,阿新蓝染色观察细胞外基质变化。实时聚合酶链反应检测各组细胞中SOX-9基因,Ⅱ型胶原,蛋白聚糖,人基质金属蛋白酶（MMP）13的表达情况,核质分离及免疫印迹检测胞核与胞质中NF-κB信号通路相关蛋白P65、p-P65、IκBα、p-IκBα表达变化。结果随着体外传代的进行终板软骨细胞表型逐渐丢失,阿新蓝染色可见细胞外基质减少,P5代细胞（体外自然退变组）较P2代细胞（空白对照组）SOX-9（P5/P2=0.488,P＜0.01）、蛋白聚糖（P5/P2=0.287,P＜0.01）、Ⅱ型胶原（P5/P2=0.182,P＜0.01）表达明显降低,NF-κB信号通路相关基因P65入核增加,胞质中p-IκBα增高,NF-κB信号通路相关基因MMP13（P5/P2=1.324,P＜0.05）表达明显上升,NF-κB信号通路抑制组较P5代细胞（体外自然传代组）核内p-P65减少,胞内p-IκBα降低,NF-κB信号通路相关基因MMP13（Bay11-7082/P5=0.611,P＜0.05）表达降低,信号通路抑制组中Ⅱ型胶原（Bay11-7082/P5=4.173,P＜0.01）、蛋白多糖（Bay11-7082/P5=2.732,P＜0.05）、SOX-9（Bay11-7082/P5=1.567,P＜0.05）等基因表达明显回升。结论 NF-κB信号通路在终板软骨细胞体外退变中发挥重要的调节作用,调控NF-κB信号通路可能会改善椎间盘退变。