白细胞介素1β诱导软骨细胞中雷帕霉素靶蛋白信号通路表达的变化

摘要

目的检测白细胞介素-1β（IL-1β）诱导下哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在大鼠关节软骨细胞中表达变化。方法无菌术下分离出大鼠关节软骨, 采用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶连续消化法提取细胞, 二代软骨细胞经过3 d预培养后, 加入不同浓度IL-1作用24 h, 通过甲苯胺蓝染色进行细胞表型鉴定后;用倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化;逆转录聚合酶链反应（PCR）检测软骨细胞中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、mTOR以及核糖体40S小亚基S6蛋白激酶（P70S6K）基因表达变化;酶联免疫测定mTOR信号通路相关蛋白表达变化。结果随着IL-1β浓度的增加, 软骨细胞表型出现由多角形变成梭形, PCR检测Ⅱ型胶原在各组中的相对表达量（对照组:0.821±0.014;1 ng/ml组:0.614±0.014;10 ng/ml组:0.549±0.009;100 ng/ml组:0.520±0.008）、蛋白聚糖（0.867±0.005;0.857±0.001;0.554±0.008;0.538±0.004）以及mTOR（0.845±0.015;0.785±0.009;0.569±0.025;0.518±0.014）的表达量减少, 且各基因组组内表达差异均有统计学意义（均P＆0.05）;而P70S6K基因表达量（0.465±0.024;0.566±0.022;0.663±0.022;0.896±0.015）增加, 各组表达差异均有统计学意义（均P＆0.05）;免疫印迹检测mTOR蛋白以及P70S6K蛋白表达量与PCR检测趋势一致。结论在软骨细退变过程中mTOR信号通路可能起着重要作用, 通过调控mTOR信号通路可能延缓关节软骨退变。