Sanger测序对运动神经元存活基因1复合杂合突变型脊髓性肌萎缩症的诊断价值

摘要

目的建立并评价Sanger测序技术在诊断运动神经元存活基因1（SMN1）复合杂合突变型脊髓性肌萎缩症（SMA）病例中的意义。方法选取首都儿科研究所2014年1月至2016年6月就诊的52例SMA患儿, 应用聚合酶链反应（PCR）技术扩增52例患儿的SMN1和SMN2基因第7外显子, Sanger测序通过识别扩增片段中SMN1和SMN2基因固有差异碱基的峰高, 判断SMN1基因纯合或杂合缺失。当SMN1基因杂合缺失时, 经PCR-Sanger测序筛查SMN基因所有外显子、外显子与内含子交界区域的变异位点。最后通过多重连接探针扩增（MLPA）方法验证SMN1基因杂合缺失, 并利用克隆测序确定突变点来自SMN1基因, 完成SMN1基因复合杂合突变的确诊。结果经Sanger测序检测的52例SMA患儿中47例为SMN1基因纯合缺失, 5例为SMN1基因杂合缺失。MLPA方法验证了后5例患儿SMN1基因拷贝数均为1, Sanger测序检测出5例患儿均存在SMN基因点突变, 并通过克隆Sanger测序验证了5例患儿突变均位于SMN1基因。结论 Sanger测序技术适用于SMN1基因复合杂合突变病例的诊断, 对提高SMA基因诊断率具有临床意义。