特异点突变型p53 minigene对人肺癌PG细胞的转染效应

摘要

目的观察一种编码密码子１７２Ａｒｇ→Ｌｅｕ的特异点突变型小鼠ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ对恶性肿瘤细胞的转染效应，并探讨该基因在恶性肿瘤基因治疗中的潜在价值。方法应用ＬｉｐｏｆｅｃｔａＭＩＮＥ和电穿孔法，把该特异点突变型ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ的表达载体与表达载体ＰＣＭＶｎｅｏ共转染ｐ５３错义突变的人肺癌ＰＧ细胞系，并以野生型和相应的密码子１７２Ａｒｇ→Ｈｉｓ点突变型ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ以及空载体转染为对照。应用小鼠特异性ｐ５３基因反转录聚合酶链反应和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法，检测外源性ｐ５３基因的ｍＲＮＡ转录。观察转基因后Ｇ４１８抗性克隆的克隆形成、细胞生长状态以及对抗癌药的敏感性改变，并应用脱氧核苷酰转移酶原位标记法分析该基因转染对细胞凋亡的影响。结果密码子１７２Ａｒｇ→Ｌｅｕ点突变型小鼠ｐ５３基因组ｍｉｎｉｇｅｎｅ转染后能较强抑制ＰＧ细胞Ｇ４１８抗性克隆的形成，细胞难以传代；基因瞬时表达后能导致细胞凋亡，提高ＰＧ细胞对抗癌药的敏感性，具有较野生型ｐ５３基因更强的抑瘤能力。结论密码子１７２Ａｒｇ→Ｌｅｕ特异点突变型ｐ５３ｍｉｎｉｇｅｎｅ对肿瘤基因治疗有重要的潜在应用价值。