过氧化物诱导LO2细胞凋亡时FasmRNA表达及Ca2+流变化的单细胞分析

摘要

目的 探讨过氧化物所致肝细胞凋亡时Fas基因表达与Ca2 + 流变化的相互关系。方法 应用全细胞膜片钳单细胞逆转录聚合酶链反应 （RT PCR）技术进行H2 O2 诱导人类正常肝细胞LO2细胞FasmRNA表达的单细胞分析 ,应用全细胞膜片钳显微荧光单细胞胞浆游离钙浓度 （[Ca2 + ]i）测量技术、流式细胞术、扫描电镜观察同期瞬时Ca2 + 流变化及早期凋亡 （Annexin V+ ）细胞指数和细胞膜变化。结果 H2 O2 作用 2h单个LO2 细胞电泳图分析可见Fas1mRNA特异性扩增条带 ;单细胞Ca2 +流测定R值明显增强 （P ＜0 .0 1,t=2 2 .2 42 4） ,[Ca2 + ]i骤升为 1115nmol/L± 2 2 7nmol/L ,与对照组的149nmol/L± 2 3nmol/L比较差异有显著性意义 （P ＜0 .0 1,t=13.37） ,Annexin V+ 细胞指数亦明显上升 （P ＜0 .0 1,t=48.41） ,细胞膜起泡。结论 H2 O2 诱导LO2 细胞凋亡时细胞内Ca2 + 失衡可能导致Fas死亡基因的活化。