人黑皮素4受体F261S突变基因的克隆和功能验证

摘要

目的 研究黑皮素 4受体（MC4R）基因的新突变F261S是否造成了MC4R蛋白功能改变。方法 用携带F261S纯合突变的先证者及正常人的基因组DNA,PCR扩增突变型及野生型MC4R基因全长,克隆到topo -TA真核表达质粒载体,测序鉴定后转染人胚肾 293细胞。用浓度为 1×10-11 ~1×10-5 mmol/L的α -黑色素细胞刺激素（α- MSH）与表达的MC4R蛋白结合后,用双荧光素酶报告基因测试系统检测胞内cAMP,萤火虫荧光 /海洋腔肠荧光二者强度之比体现了cAMP浓度。结果 α- MSH浓度在 1×10-9 ~1×10-8 mmol/L时野生型胞内双荧光强度比值显著高于突变型细胞（P＜0 .05）,在 1×10-7 ~1×10-5 mmol/L时差异更为显著 （P＜0 .01）。结论 F261S突变使MC4R介导的信号转导能力下降,此突变与中国人早发性肥胖有关。