丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1对缺氧诱导因子-1转录活性调节机制的研究

摘要

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶- 1 （MKP -1）参与缺氧诱导因子- 1 （HIF- 1）转录活性调节的机制。方法 采用Western印迹检测常氧及缺氧状态下磷酸化细胞外信号调节激酶ERK和总ERK在胃癌细胞系SGC7901中的表达;利用脂质体将正义真核表达载体及针对MKP-1的小干扰RNA载体转入SGC7901细胞;借助双荧光素酶基因报告系统（dualluciferasereporter, DLR）检测ERK通路抑制剂PD98059对SGC7901细胞中HIF 1转录活性的影响。结果 （ 1 ）缺氧时磷酸化ERK在SGC7901中的含量增加,而总ERK的表达不变; （2）缺氧12h时不同浓度的PD98059均能抑制HIF -1的转录活性;而p38通路抑制剂SB203580对HIF -1的转录活性无影响; （3）将针对MKP 1的小干扰RNA载体和空载体分别瞬时转入SGC7901细胞,转染24h后, 缺氧12h时磷酸化ERK在小干扰RNA载体转染细胞（U6M2）的表达高于空载体转染细胞（U6）; （4）不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞中HIF- 1的转录活性,当PD98059浓度达50μmol/L以上时,U6和U6M2细胞中HIF- 1的转录活性差异无统计学意义。（5）不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞血管内皮生长因子（VEGF）的产生,当PD98059浓度达50μmol/L以上时,VEGF的分泌量在U6和U6M2细胞中差异无统计学意义。结论 在胃癌细胞系SGC7901中,缺氧时