γ-GCS基因抑制元件E-box的实验研究

摘要

目的 明确大鼠肺泡上皮细胞γ谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位编码基因（GCLC基因）负调控区域（ -745-705）上的功能元件E box作用。方法 利用迁移率变动试验（EMSA）和超级迁移率变动试验证实大鼠肺泡上皮细胞GCLC基因负调控区域的E- box元件能与转录因子USF1 /USF2特异性的结合;通过共转染USF1 /USF2表达质粒（pCMV -USF1 /pCMV- USF2）和GCLC -luc确认E- box元件在基因调控中的作用;最后通过构建USF1 /USF2的逆转录病毒载体,将表达USF1 /USF2的重组逆转录病毒感染肺泡上皮细胞, 用Western印迹检测细胞GCLC蛋白表达受影响的情况,进一步确定E box元件与USF作用在GCLC基因表达中的最终作用。结果 EMSA和超级迁移率变动试验证实GCLC基因负调控区域的功能元件是E- box,且该元件与USF特异结合参与GCLC基因的调控;共转染USF1 /USF2表达质粒的细胞GCLC基因表达明显下降;Western印迹证实感染重组USF1 /USF2逆转录病毒使肺泡上皮细胞的GCLC蛋白表达明显下降。结论 E -box元件通过与转录因子USF作用抑制GCLC基因表达,E box元件是γGCS基因的重要的抑制元件。