谷氨酸棒状杆菌ATCC14067阻遏蛋白ArgR与L-精氨酸合成途径相关基因的相互作用

摘要

在细菌中阻遏蛋白ArgR通过与精氨酸合成途径相关基因中的保守序列结合,阻遏相关基因的转录.在谷氨酸棒状杆菌ATCC 14067中,精氨酸生物合成涉及的基因位于基因簇argCJBDFRGH和carAB中.构建重组菌株E.coli BL21 (DE3)/pET22b-argR,诱导表达ATCC 14067来源的ArgR,成功得到目的蛋白.利用分子筛色谱柱对ArgR蛋白进行分析,表明ArgR蛋白相对分子质量在108ku左右,在活性状态下ArgR蛋白为六聚体.合成生物素标记的谷氨酸棒状杆菌ATCC 14067来源的argC、argJ、argB、argF、argG、argH、carA基因片段,采用凝胶阻滞实验(EMSA)观察ArgR蛋白与其在体外的相互作用.结果表明,ArgR蛋白能够在体外与argC基因-26～+32 bp、argB基因-86～-29 bp、argG基因-161～104bp,carA基因-99～-42 bp结合,且与argB基因的结合程度最大,但不与arg、argF、argH基因片段结合.本文首次将argC、argB、argG、carA基因中ArgR蛋白结合的靶标位点定位在60 bp内,为更深入的研究谷氨酸棒状杆菌ATCC 14067中精氨酸合成的调控机制提供了理论依据.