莲藕渣多糖通过MAPK/NF-κB途径调节小鼠腹腔巨噬细胞的免疫应答

摘要

揭示莲藕渣多糖(Lotus Root Residue Polysaccharide,LRP)对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞的体外免疫调节作用,探讨LRP刺激腹腔巨噬细胞产生免疫应答的信号通路。利用MTT法测定不同浓度LRP对细胞活力影响;选用不同浓度梯度及同一浓度不同时间点的LRP刺激细胞,Griess法检测细胞NO释放量;半定量PCR检测细胞TLR4、TLR2受体及免疫关联因子(TNF-α、IL-6、i NOS、1L-1β、COX-2、Nfkbia)m RNA的表达,蛋白印迹法检测其MAPK通路(ERK1/2、JNK、p38)及Akt的磷酸化,同时研究了LRP对和蛋白AP-1及NF-κB的影响,对LRP对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节活性及其信号机制进行评估。研究表明,LRP对小鼠腹腔巨噬细胞无毒作用,25~50μg/mL LRP促进细胞生长,细胞存活率为104.82%和102.53%(p<0.05);NO浓度随LRP浓度提高而显著提高(p<0.05),200μg/mL LRP刺激细胞产生一氧化氮(NO)为36.47μmol/L,200μg/mL的LRP处理细胞,NO产量随培养时间延长而增多(p<0.05),24h时NO浓度为44.18μmol/L;m RNA基因表达研究显示,LRP调控TLR4、TLR2受体,并调节免疫基因的表达;此外,LRP促进核蛋白c-Jun、p65由核外转向核内,增强ERK1/2、JNK、p38蛋白的磷酸化水平,但对于Akt的磷酸化没有显著影响。因此,莲藕渣多糖(LRP)可通过MAPK/NF-κB途径增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞免疫应答。