检测蜜蜂急性麻痹病毒TaqMan实时荧光RT-PCR方法的建立和初步应用

摘要

[背景]蜜蜂急性麻痹病毒(Acute Bee Paralysis Virus,ABPV)是一种高毒力的蜜蜂病毒,可以引起蜜蜂的大批死亡和蜂群衰竭.[目的]建立一种快速、灵敏的ABPV实时荧光RT-PCR检测方法.[方法]根据ABPV衣壳蛋白基因保守序列设计引物和探针,通过对引物、探针浓度和退火温度等反应条件进行优化,建立基于TaqMan探针检测ABPV的实时荧光RT-PCR方法,并对方法的灵敏性、特异性和稳定性进行验证.[结果]ABPV实时荧光RT-PCR检测方法在9.8× 101-9.8× 108 copies/μL之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R2为0.998,扩增效率为103.8％.该方法的检测灵敏度为9.8 copies/μL;对其他蜜蜂病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性;重复性试验结果显示组内和组间的变异系数分别为0.19％-0.80％和0.57％-1.07％,重复性良好.对2018年-2019年在福建地区采集的70份蜜蜂样品进行ABPV检测,阳性率为2.86％.[结论]建立的ABPV实时荧光RT-PCR检测方法能用于该病的实验室检测、流行病学调查和疫情监测.