鹿儿岛被毛孢分生孢子胞外黏液蛋白提取与鉴定

摘要

[背景]分生孢子表层黏液在虫生真菌与昆虫的互作中扮演着重要角色.鹿儿岛被毛孢是寄主专一、孢子表面具黏液层的虫生真菌,但其胞外黏液成分尚不清楚.[目的]优化鹿儿岛被毛孢分生孢子黏液蛋白的提取方法,对黏液蛋白组分进行质谱鉴定,探究分生孢子胞外黏液的蛋白成分.[方法]用低浓度还原剂二硫苏糖醇(Dithiothreitol,DTT)对胞外黏液进行温和洗脱并优化提取条件,聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE)检测蛋白提取浓度,用碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色法检测孢子细胞膜选择通透性,通过肽段酶解、LC-MS/MS数据采集及蛋白质比对分析鉴定蛋白质.[结果]鹿儿岛被毛孢分生孢子黏液蛋白的最佳提取条件:孢子浓度为5× 107 cells/mL,DTT浓度为2 mmol/L,4°C提取24 h;黏液蛋白提取后不影响孢子细胞膜通透性.提取的黏液蛋白共鉴定到蛋白质77个,蛋白丰度排前10的蛋白多为分泌性小分子蛋白,包括未注释的蛋白、几丁质酶、脂酶或是与昆虫体壁降解相关的酶类.[结论]鹿儿岛被毛孢胞外黏液中富含与寄主识别、穿透相关的蛋白质,与被毛孢的黏附、识别功能密切相关.