下调bla表达提高pcDNA3.1+在重组菌中的稳定性

摘要

高拷贝质粒pcDNA3.1+在鼠伤寒沙门氏菌SL7207中不稳定.通过去除pcDNA3.1+中氨苄青霉素抗性基因(bla基因)的启动子序列,仅保留其核糖体结合位点,构建了新质粒pmcDNA3.1+.SL7207(pmcDNA3.1+)在含与不含氨苄青霉素的培养基中均能稳定保留其质粒.SL7207(pmcDNA3.1+)的β-内酰胺酶活力明显低于SL7207(pcDNA3.1+),且接种SL7207(pmcDNA3.1+)的液体培养基中的氨苄青霉素不易被降解.腹腔接种小鼠7d后,脾脏中SL7207(pmcDNA3.1+)的质粒稳定性仍保持在95%以上,而SL7207(pcDNA3.1+)免疫后第3d 99%丢失质粒.所以,通过降低bla基因的表达水平,为解决高拷贝质粒在沙门氏菌中的稳定性问题提供了新方法.