近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶基因的克隆与表达

摘要

根据纯化得到的(R)-专一性羰基还原酶(rCR)蛋白质测序结果推导出的核苷酸序列设计引物,以筛选得到的近平滑假丝酵母(Candidaparapsilosis)CCTCC M203011基因组为模板,通过PCR扩增目的片段,克隆后测序.核苷酸序列测定结果表明rcr基因全长1011bp,共编码336个氨基酸,分子量为35.9 kD.将序列递交NCBI比对,与醇脱氢酶超家族成员序列同源性达99%.在大肠杆菌(Escherichia coli)JM109中表达rcr基因,重组菌可还原β-羟基苯乙酮得到(R)-苯乙二醇,光学纯度为100%e.e,摩尔产率为80.4%,在反应体系中无需外加辅酶再生系统即可完成转化.