沙门氏菌荧光实时定量PCR检测试剂的研制及应用

摘要

荧光实时定量PCR技术是近年来广泛应用于沙门氏菌快速检测的现代方法之一,本研究建立了检测沙门氏菌快速、敏感、特异以及准确定量的FQ-PCR方法.采用沙门氏菌fimY基因序列,设计特异引物和探针,通过对Taq酶、Mg2+和引物探针浓度等反应体系和条件的优化,然后进行特异性和适用性实验.最优化结果为:Taq酶用量2.5U;Mg2+浓度为3.75×10-3 mol/L;引物浓度为0.65×10-6 mol/L,探针浓度为0.30×10-6 mol/L;循环条件为step1:95℃2min,step2:95℃5s,60℃40s,40cycles.结果表明该FQ-PCR检测试剂具有快速、简单、灵敏度高、特异性强和适用范围广等优点,可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等领域.