酿酒酵母NAD(H)激酶Pos5p在细胞抵抗氧化胁迫中的作用

摘要

酿酒酵母线粒体NAD(H)激酶Pos5p显示出重要功能,其缺失将导致细胞抗氧化性能出现障碍.为了了解Pos5p的抗氧化作用机制及其与调节辅酶NAD(H)和NADP(H)之间的关系,比较了在不同类型的氧化胁迫试剂作用下,野生型BY4742、POS5基因缺失体pos5Δ及其回补体pos5Δ/POS5-YEp的生长表型,同时采用高效液相色谱测定细胞内辅酶含量.结果表明,在超氧生成试剂甲萘醌(VK3)、过氧化氢(H2O2)和GSH消耗试剂马来酸二乙酯(DEM)存在时,pos5Δ都表现出明显的生长缺陷,而各抗氧化基因缺失体只在其相应胁迫下表现出生长缺陷.在正常生长条件下,pos5Δ的NADPH含量降低,pos5Δ/POS5-YEp则提高,表明Pos5p对胞内NADPH的供应有重要作用.在VK3、H2O2和DEM胁迫下,BY4742、pos5Δ及pos5Δ/POS5-YEp的NADP(H)含量均有不同程度的下降,其中pos5Δ的NADP(H)/NAD(H)比率下降最为严重,而pos5Δ/POS5-YEp较pos5Δ有明显提高,这与其氧化胁迫表型相一致.因此,在细胞面临不同类型的氧化胁迫时,Pos5p都能有效行使其NAD(H)激酶活性,补充NADP(H)的损耗,从而对细胞起到抗氧化保护作用.