趋化因子受体CXCR4b在大肠杆菌中的高效表达、增溶及纯化

摘要

膜蛋白在细胞分化、信号转导等生理活动中发挥着重要作用,然而膜蛋白结构与功能的研究却受到高质量蛋白制备的严重制约.将斑马鱼趋化因子受体CXCR4b基因克隆到pMAL-p4x 表达载体中,在大肠杆菌TB1中表达麦芽糖结合蛋白(MBP)-CXCR4b融合蛋白.通过系统优化其发酵表达条件,实现了CXCR4b的过量表达.最佳表达条件为:宿主菌选用大肠杆菌TB1,TB培养基,诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导时机为对数中后期.通过对10种不同表面活性剂的筛选,发现DM、FC-14和Brij35等表面活性剂对CXCR4b有较好的增溶效果.利用Ni2+亲和色谱和S200凝胶色谱两步纯化,得到CXCR4b的纯度可达90%以上.圆二色谱检测显示纯化的CXCR4b呈典型的α螺旋结构.