利用基因工程菌HC01固定化细胞转化生产D-对羟基苯甘氨酸

摘要

对一菌两酶工程菌HC01转化底物DL-对羟基苯海因(DL-HPH)的最适条件及其细胞固定化进行了研究,HC01游离细胞转化DL-HPH的最适条件为40℃、pH 7.5.通过对固定化细胞酶活力测定,确定细胞固定化的最优条件为海藻酸钠浓度2.5%、细胞浓度0.029 g/mE、钙离子浓度3%.固定化HC01的热稳定性比游离细胞高5℃,二价金属离子Mn2+,Mg2+、Cu2+、Co2+和Ni2+在浓度为0.1 mmol/L时对固定化细胞中D-海因酶(HYD)和N-氨甲酰-D-氨基酸酰胺水解酶(CAB)两酶的活力无显著影响,Mn22+和Mg2+可分别使游离细胞中CAB活力提高至原来的2.1和2.7倍.在氮气保护下,当初始pH为9.0、转化温度为40℃、转速为80 r/min,利用固定化HC01转化30 g/L的DL-HPH时,36 h后转化率可达97%左右,产物D-HPG经纯化后光学纯度达到99.7%,得率可达85%.