猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立

摘要

采用PCR方法从携带猪瘟病毒兔化弱毒(Hog cholera lapinized virus,HCLV)全长基因组cDNA的质粒pPOHCLV中扩增到长度为2000 bp左右NS3基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建成重组原核表达载体pETNS3.将pETNS3在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达,SDS-PAGE分析重组蛋白NS3主要以包涵体形式表达,分子大小约95 kD.Western Blotting分析表明重组蛋白NS3具有免疫原性.采用Ni+亲和层析方法纯化得到重组蛋白NS3(90%).以纯化的重组蛋白NS3为抗原初步建立了检测CSFV NS3抗体的间接ELISA方法,检测221份不同猪群和年龄猪的血清样品.检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比.阳性符合率为83.33%,阴性符合率为89.38%,总符合率为86.43%.30份存在差异的血清样品用间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,IFA)进行检测,结果显示IFA检测结果与NS3间接ELISA和IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒符合率分别为56.67%和43.33%.