利用DNS法快速分析及优化柚皮苷的酶解过程

摘要

[目的]建立采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法快速测定柚皮苷水解率的方法,并利用该方法对柚苷酶催化水解柚皮苷生成柚皮素的反应过程进行优化研究.[方法]利用棘孢曲霉JMUdb058发酵得到的柚苷酶催化水解柚皮苷,采用DNS法对柚皮苷酶解过程中还原糖的生成量进行分析,经过换算得到柚皮苷的水解率,并在此基础上通过单因素实验优化柚皮苷的酶解过程.[结果]在柚皮苷的水解过程中,还原糖的生成量与柚皮苷的水解量及柚皮素的生成量均呈现出良好的线性关系,因此可利用DNS法测定体系中还原糖的生成量,并通过换算得到柚皮素的生成量.利用该方法优化柚皮苷的酶解过程得到柚苷酶转化柚皮苷的最适温度为50℃、pH为5.0、酶用量为8 U/mL、底物浓度为0.2 g/100 mL.在此条件下,柚皮苷酶解150 min后可达到平衡,此时其水解率为85％.通过Lineweaver-Burk双倒数作图法测得Km为413.44 mg/L,Vmax为0.022 g/(min.L).[结论]采用DNS法分析柚苷酶酶解柚皮苷的过程,具有方便快捷的特点,为柚皮苷的生物转化生成柚皮素的研究提供了新方法.