黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究

摘要

[目的]制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFBO抗体,建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测.[方法]用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.采用体内诱生腹水法制备抗体,通过间接ELISA方法分别测定抗体亚类和效价.经优化实验条件,建立稳定的间接竞争ELISA检测方法,并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1.[结果]获得4株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选择3B9细胞株制备抗体,测定抗体亚类为IgG1,效价为1:204 800,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.2％、33.9％、1.8％和4.1％,与赭曲霉毒素A、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应.以此单抗构建了AFB1间接竞争ELISA检测方法,在AFB1浓度为1.04-25.00 μtg/L范围内呈线性(R2=0.993 1),检测限为1.04 μg/L,半数抑制率(IC50)为6.03 μtg/L,平均加标回收率在线性范围内可达85％-120％,变异系数均小于10％.[结论]通过饲料样品检测证实,该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好,可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检.