2308、M28、S1330、16M四株布鲁氏菌灭活参数研究

摘要

[目的]比较不同灭活方法对布鲁氏菌灭活的效果,确定灭活参数,为制备布鲁氏菌灭活抗原提供参考.[方法]将4株布鲁氏菌参考强毒株2308(牛种)、M28(羊种)、S1330(猪种)以及16M(羊种)分别经大豆酶消化蛋白胨(TSA)培养基培养繁殖后,用生理盐水制成(4-8)×1010 CFU/mL的菌悬液,分成等份于80℃灭活不同时间,另将同样浓度的菌悬液分别用不同浓度甲醛于37℃灭活不同时间,通过灭活检验,确定灭活效果.取经甲醛和热灭活的16M抗原,分别以1×101o CFU/只剂量皮下注射1.5-2.0 kg家兔2只,免疫6周内,每周采血用虎红平板凝集试验(RBT)和试管凝集试验(SAT)测定抗体效价.[结果] 80℃、5 min可灭活2308、S1330和16M三种菌株,80℃、10 min可灭活全部4种菌株.0.2％甲醛灭活7d,4种试验菌株均不能被彻底灭活;0.4％甲醛在12 h内只能灭活16M,72 h可灭活M28; 0.4％甲醛灭活2308和S1330两次试验结果差异较大.0.6％甲醛可在72 h内灭活4种试验菌.不同方法灭活的16M抗原免疫家兔后,其血清抗体虎红平板凝集和试管凝集效价消长趋势基本一致,甲醛灭活的抗原免疫原性略高于热灭活抗原.[结论]80℃热灭活和0.6％甲醛灭活均可用于对布鲁氏菌的灭活,且不影响布鲁氏菌的免疫原性.