大肠杆菌表达SLA-3蛋白与口蹄疫病毒多肽的复性研究

摘要

[目的]研究大约克猪SLA-3 (SLA-3-YDY)蛋白在体外与口蹄疫病毒多肽的复性.[方法]设计SLA-3-YDY胞外区引物,PCR扩增目的基因,并将此片段克隆至pMD19-T SimpleVector上,双酶切筛选出阳性克隆并测序,测序正确的片段连接至表达载体pET-21a(+)上,转化大肠杆菌感受态BL21细胞中,IPTG诱导,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达.超声破碎菌体,提取包涵体蛋白,通过稀释复性法将重链SLA-3-YDY、轻链sβ2m和口蹄疫病毒多肽Hu52按摩尔比1∶1∶1加入复性液,经分子筛层析纯化并检测复合物是否复性.[结果]PCR扩增获得SLA-3-YDY目的基因,经测序阳性克隆序列与原序列一致.经酶切鉴定,证明目的基因与pET-2la(+)载体成功连接,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE检测,显示目的基因表达,大小约33 kD,SDS-PAGE检测包涵体蛋白,证明包涵体蛋白大小与菌体蛋白大小一致.分子筛及SDS-PAGE检测发现,通过稀释复性法实现了重链、轻链和多肽的复性,并得到蛋白复合物SLA-3-Hu52-sβ2m (45 kD).[结论]构建了大约克猪SLA-3原核表达载体,获得目的蛋白,实现了口蹄疫病毒多肽Hu52与SLA-3重链及轻链的复性,为今后进一步研究SLA-3的结构和功能奠定基础.