犬种布鲁氏菌ZG株单克隆抗体4H3抗原模拟表位的筛选及分析

摘要

【背景】目前犬布鲁氏菌病诊断存在一定的困难。【目的】筛选并研究犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株的特异性抗原表位。【方法】利用噬菌体肽库展示技术,以犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株作为靶分子,包被酶标板,用12肽随机肽库经过3轮生物淘洗程序进行筛选。经过3轮筛选后,噬菌体产出率从5.00×10^(−7)增加到9.84×10^(−6),假阳性率逐轮降低。从第3轮筛选的阳性克隆中随机挑取14个进行增殖,提取基因组DNA,进行测序分析;并通过iELISA和cELISA检测阳性克隆的亲和性和特异性。【结果】14株阳性单克隆噬菌体共出现3种不同的短肽序列,分别是KMSIRHPIRLPI、ILRRRRKRIIQI和QRIHMRLTTQS;iELISA结果表明3种短肽序列与单克隆抗体的亲和性依次为KMSIRHPIRLPI>ILRRRRKRIIQI>QRIHMRLTTQS;cELISA结果显示短肽KMSIRHPIRLPI和ILRRRRKRIIQI特异性较强。对亲和性较强、特异性较高的2条短肽KMSIRHPIRLPI和ILRRRRKRIIQI展开具体分析,比对分析表明KMSIRHPIRLPI与犬种布鲁氏菌RM6/66菌株的肽酶C26家族蛋白(PuuD)有比较高的相似性,氨基酸符合率为75%,而且存在4位连续相似氨基酸;ILRRRRKRIIQI与布鲁氏菌6/66菌株中3-氧酰基-[酰基载体蛋白]还原酶(OAR)相似性较高,氨基酸符合率为75%,存在2位连续相似氨基酸。【结论】利用噬菌体肽库展示技术筛选出与犬种布鲁氏菌ZG分离株单克隆抗体特异性结合的短肽序列。