大规模猪肝细胞低温保存方法的建立

摘要

目的建立大规模猪肝细胞的低温保存方法以满足生物型人工肝治疗的需要.方法用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞;加入本实验室配制的含有10%二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的营养液中;分别采用两种降温方法使(1～2)×1010猪肝细胞保存在-196℃液氮中;1个月后复温,观察在同一条件下培养不同时间后猪肝细胞形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能.结果用两种降温方法保存的肝细胞,复温后细胞的存活率均较高(梯度降温组和程控降温组存活率分别较冻存前降低了4.7%和8.6%),其中前者肝细胞的尿素、葡萄糖合成功能较后者高.结论所建立的冻存方法简单易行,可保存大量的猪肝细胞.