豆豉纤溶酶基因在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

摘要

豆豉纤溶酶是从豆豉中发现的新型纤溶酶.从枯草杆菌DC-12中提取总DNA,PCR法扩增pro-DFE基因.将Pro-DFE基因插入载体pET-32a,构建表达质粒pET-pro-DFE,转化大肠杆菌BL21(DE3),对重组菌株进行变温诱导表达,重组菌株于37 ℃培养至OD600为0.6时,加入终浓度为0.4 mmol/L的IPTG于24 ℃进行诱导,SDS-PAGE显示可溶性重组融合蛋白约占重组蛋白的60%.且少量融合重组蛋白发生自切割,形成成熟的豆豉纤溶酶,破菌上清中含有成熟的豆豉溶栓酶,纤溶活性为200 IU/mL.重组酶经纯化后比酶活为1 280 IU/mg.