流式细胞术鉴定结核分枝杆菌利福平异质性耐药可行性分析

摘要

目的探讨流式细胞术(FCM)检测结核分枝杆菌(MTB)利福平(RFP)异质性耐药的可行性。方法将MTB临床分离株分别用12.5、25、50和100μg/mL RFP处理3、7和10 d后,用荧光素双醋酸酯(FDA)染色,采用FCM检测其平均荧光强度(MFI),计算敏感指数(实验管MFI/对照管MFI),并进行差异性分析。确定不影响RFP耐药MTB临床分离株生长、但抑制RFP敏感MTB临床分离株生长的RFP处理浓度和时间。将30株RFP敏感MTB临床分离株和30株RFP耐药MTB临床分离株菌液混合,得到RFP耐药MTB所占比例分别为0%、25%、50%、75%和100%的RFP异质性耐药MTB菌液,按照确定的RFP浓度和时间处理,计算FDA染色后的敏感指数。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估不同比例RFP异质性耐药MTB菌液的敏感指数界值和检测性能。结果基于FDA的FCM检测MTB RFP异质性耐药的较优RFP处理浓度为50μg/mL,作用时间为10 d;用50μg/mL RFP处理MTB 10 d时,基于FDA的FCM鉴别含0%、25%和100%的RFP异质性耐药MTB菌液样本的敏感指数界值分别为0.48和0.83,敏感性分别为96.2%和86.7%,特异性分别为96.7%和83.3%;处理14 d时,该方法鉴别含0%、25%和100%RFP异质性耐药MTB菌液样本的敏感指数界值分别为0.37和0.77,敏感性分别为96.7%和96.7%,特异性分别为93.3%和86.7%。结论FCM在MTB异质性耐药检测中具有较高的应用价值。