人血清哇巴因UPLC-MS/MS检测方法的建立和方法比对

摘要

目的 建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测人血清哇巴因的方法.方法 采用高特异性的UPLC-MS/MS,以氘标记的哇巴因-d3作为内标.样本采用固相萃取(SPE)前处理方法,以反相色谱柱负离子模式及电喷雾电离源(ESI)检测血清哇巴因水平.对建立的方法进行方法学(基质效应、回收率、准确度、批内精密度、批间精密度及稳定性)验证.采用建立的UPLC-MS/MS方法检测20名体检健康者及40例高血压患者血清哇巴因水平,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)进行比较.结果UPLC-MS/MS检测血清哇巴因的标准曲线范围为0.02～5.0 ng/mL,最低定量检测限(LLOQ)为0.02 ng/mL.采用ABN固相萃取小柱进行样本前处理的基质效应较小,且回收率较高,达85％.LLOQ和低值(0.06 ng/mL)、中值(0.6 ng/mL)、高值(4 ng/mL)质控品的准确度分别为108.0％、89.2％、101.0％、103.0％.3个水平质控品的批内变异系数(CV)分别为2.87％、1.95％、0.56％,批间CV分别为5.98％、1.90％、0.75％.样本室温过夜放置16 h及样本前处理后室温放置自动进样器48 h的偏差均<15％.采用UPLC-MS/MS检测哇巴因,正常对照者及高血压患者血清中均未检测到哇巴因.采用ELISA测定血清哇巴因,高血压患者为0.096 ng/mL,正常对照者为0.062 ng/mL.UPLC-MS/MS检测5个水平(0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 ng/mL)的哇巴因标准品,其测定结果与对应的哇巴因标准品浓度呈正相关,且线性较好(r2>0.99),准确度较高;而ELISA检测5个水平哇巴因标准品的结果均很接近(0.0249～0.0296 ng/mL).结论 建立了检测人血清哇巴因的UPLC-MS/MS方法,未检测到正常人及高血压患者的血清哇巴因.UPLC-MS/MS与ELISA检测血清哇巴因的结果存在较大差异.