人心肌线粒体肌酸激酶的提纯及抗体制备

摘要

目的从人心肌中分离纯化肌小节型线粒体肌酸激酶(sMtCK),制备抗血清,从抗血清中制备对sMtCK有特异免疫反应的抗体,建立酶联免疫吸附试验(ELISA),测定血清sMtCK.方法采用超低温高速离心、硫酸铵分级提取、Sepharose CL6B层析等技术分离纯化sMtCK,免疫新西兰大白兔.应用自制抗sMtCK建立ELISA检测健康体检者、心肌炎及急性心肌梗死(AMI)患者血清sMtCK.结果经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot鉴定,纯化的sMtCK为单一蛋白质条带.制备的抗sMtCK多克隆抗体在琼脂糖免疫扩散实验和ELISA中的抗体效价分别为1∶32和1∶800.自制抗体建立的ELISA检测心肌炎和AMI患者的血清sMtCK阳性率分别为51.6%(16/31)和54.1%(20/37),与健康对照组相比差异有显著性(P<0.01).结论经离心、提取、纯化所得的sMtCK是免疫纯.建立的ELISA检测血清sMtCK有助于心肌炎和AMI的诊断.