双抗体夹心ELISA测定人广泛型线粒体肌酸激酶方法的建立

摘要

目的 建立测定人血清广泛型线粒体肌酸激酶(uMtCK)浓度的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA).方法 应用原核表达的uMtCK重组蛋白免疫小鼠获得7株单克隆抗体,采用棋盘格滴定法筛选出最佳双抗体组合,其中抗体19F11进行辣根过氧化物酶(HRP)标记作为检测抗体,抗体3C1作为俘获抗体,建立检测人uMtCK双抗体夹心ELISA方法,并进行方法学评价.同时采用该法检测50名健康体检者和85例肿瘤标志物[甲胎蛋白(AFP)或癌胚抗原(CEA)]阳性患者的血清.结果 通过筛查获得配对抗体,建立检测人uMtCK的双抗体夹心ELISA方法.该法的检测限为28.8 ng/mL,批内变异系数(CV)为4.5%～7.7%,批间CV为8.2%～13.5%,平均回收率为97.1%.用该法检测50名健康体检者血清uMtCK浓度,结果均为阴性;85例肿瘤标志物阳性患者中有15例检出uMtCK,浓度为52.8~1 442.2 ng/mL.结论 建立的双抗体夹心ELISA可以用于测定人血清uMtCK浓度.