濒危植物沉水樟ISSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要

为从分子水平上探讨濒危物种沉水樟种质资源的保护机制,以其基因组DNA为模版,开展ISSR-PCR反应体系的研究,对各反应因子水平、引物退火温度和循环参数进行优化,确定适于沉水樟ISSR-PCR反应的最佳体系：20 μL反应体系中各反应物的最适含量为模板75 ng、引物0.4μmol/L、dNTP 200 μmol/L、Taq酶1.25 U、Mg2＋ 1.5 mmol/L;扩增程序为：94℃预变性7 min; 94℃变性30 s,53.0～58.0℃退火45 s,72℃延伸90 s,45个循环;72℃延伸7 min,4℃保存.