继发性甲状旁腺功能亢进症来源的甲状旁腺原代细胞的培养及鉴定

摘要

目的分离、培养及鉴定继发性甲状旁腺功能亢进症患者来源甲状旁腺。方法采用胶原酶消化法提取10例继发性甲状旁腺功能亢进症的甲状旁腺原代细胞进行体外培养,通过显微摄像、细胞计数研究其形态学变化及生长特性,用细胞免疫荧光、qRT-PCR及Westernblot检测原代及传代甲状旁腺细胞甲状旁腺素(PTH)、钙敏感受体(CaSR)和神经胶质细胞缺失因子2(GCM2)mRNA及蛋白的表达情况,对所得细胞进行分析鉴定。结果本研究成功提取甲状旁腺原代细胞,其细胞PTH免疫荧光结果为阳性,细胞增长曲线显示甲状旁腺细胞体外分散培养的群体倍增时间约为71.61 h。P2代细胞分泌PTH较P0、P1代细胞减少(P<0.001)。P1代细胞和P0代细胞间PTH(P=0.572)和GCM2(P=0.892)的mRNA表达差异无统计学意义,PTH(P=0.572)和GCM2(P=0.892)的蛋白表达差异也无统计学意义。但P1代细胞的CaSR mRNA(P=0.017)和蛋白表达(P=0.006)均较P0代甲状旁腺细胞减少。结论采用胶原酶消化法培养的甲状旁腺细胞一定程度上具有与在体细胞相似的细胞生物学特性。