小鼠SRS白血病病毒前病毒DNA片段的分子克隆

摘要

从重组质粒pSF_(11)中提取SRS白血病病毒(SRSV)5kb DNA片段,用双脱氧法对其两末端进行测序,每端测得约150bp,从中筛选出PCR引物。SRSV新鲜感染NIH/3T3细胞,从感染细胞的胞质内提取前病毒DNA。用PCR法对SRSV前病毒DNA中的约3.4kb片段进行扩增,扩增产物用BamHⅠ酶切后与碱性磷酸单酯酶处理的pUC_(19)载体连接,并转化大肠杆菌JM_(103),得到含约3.4kb前病毒DNA片段插入子的重组质粒,并经Southern Blot证实,定名为pSF_(12),该克隆的SRSV DNA片段含有部分的env和pol基因。pSF_(12)和pSF_(11)构成SRSV的完整基因克隆。