丙型肝炎NS5ATP6基因原核表达载体的构建和表达纯化及多克隆抗体的制备

摘要

目的 构建丙型肝炎病毒NS5A蛋白反式激活蛋白6基因的原核表达载体并进行表达、鉴定.方法 从已构建的pGBKT7-NS5ATP6质粒上切取NS5ATP6基因,再克隆入pET32a(+)质粒,构建pET32a(+)-NS5ATP6表达重组体.结果 以pET32a(+)-NS5ATP6重组体分别转化DH5α和 Rosseta 大肠埃希菌后,经IPTG诱导, pET32a(+)-NS5ATP6表达出分子量为41KD左右的重组蛋白.免疫动物并经Western blot检测证实其具有良好的抗原性.结论 成功地构建了原核表达载体pET32a(+)-NS5ATP6,诱导表达和纯化了NS5ATP6融合蛋白,并制备了该蛋白的多克隆抗体,为下一步该基因功能研究奠定了基础.