miR-34a通过激活AMPK/mTOR通路增强鼻咽癌细胞顺铂敏感性

摘要

目的:探讨微小RNA(microRNA,miR)-34a对鼻咽癌细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测鼻咽癌顺铂耐药HNE1/DDP细胞和亲本HNE1细胞中miR-34a的表达水平。将HNE1/DDP细胞分为未转染组(正常培养)、miR-NC组(转染阴性对照)和miR-34a组(转染miR-34a模拟物),实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-34a表达,噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞对顺铂的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路相关蛋白AMPK、磷酸化(p)-AMPK、mTOR、p-mTOR的表达水平。结果:与HNE1细胞比较,HNE1/DDP细胞中miR-34a表达水平明显降低(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-34a组细胞中miR-34a表达水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平及p-AMPK/AMPK水平明显升高,顺铂对细胞的半数抑制浓度(the half inhibitory concentration,IC_(50))、Bcl-2蛋白表达水平和p-mTOR/mTOR水平均明显降低(P<0.05)。结论:miR-34a过表达可通过诱导细胞凋亡增强鼻咽癌HNE1/DDP细胞顺铂敏感性,其作用机制可能与激活AMPK/mTOR通路有关。