肝癌细胞系中miR-9和转录因子E2F1的表达及其与药物敏感性的关系

摘要

目的:研究肝癌细胞系中微小RNA(microRNA,miR)-9和转录因子E2F1的表达及其与药物敏感性的关系.方法:体外培养肝细胞系HL-7702,肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7,处理细胞分miRNA NC组、miR-9 inhibitor组、顺铂(CDDP)组、CDDP+miRNA NC组、CDDP+miR-9 inhibitor组.实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-9表达水平;免疫印记(Western blot,WB)法检测E2F1蛋白水平;CCK-8法检测miR-9对细胞存活的影响;克隆计数检测miR-9对细胞数量的影响.结果:与正常肝细胞系HL-7702相比,肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7中miR-9、E2F1蛋白水平升高(P<0.05).在HepG2、Hep3B2.1-7细胞系中,与miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组、CDDP+miR-9 inhibitor组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量降低(P<0.05).与miR-9 inhibitor组相比,CDDP组、CDDP+miRNA NC组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量升高(P<0.05);CDDP+miR-9 inhibi-tor组细胞克隆数量、48 h细胞OD450降低(P<0.05);与CDDP组、CDDP+miRNA NC组相比,CDDP+miR-9 inhibitor组miR-9、E2F1蛋白表达水平、细胞克隆数量降低(P<0.05).在HepG2细胞系中,与miRNA NC组、CDDP组、CDDP+miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组、CDDP+miR-9 inhibitor组(12、24、48 h)细胞OD450降低(P<0.05).在Hep3B2.1-7细胞系中,与miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组(12、24、48 h)、CDDP+miR-9 inhibitor组(6、12、24、48 h)细胞OD450降低(P<0.05);与CDDP组相比,miR-9 inhibitor组(12、24、48 h)、CDDP+miR-9 inhibitor组(3、6、12、24、48 h)细胞OD450降低(P<0.05);与CDDP+miRNA NC组相比,miR-9 inhibitor组(24、48 h)、CDDP+miR-9 inhibitor组(12、24、48 h)细胞OD450降低(P<0.05).结论:肝癌细胞系HepG2、Hep3B2.1-7中miR-9和E2F1表达上调;干扰miR-9可抑制E2F1表达,抑制细胞增殖、抑制细胞克隆形成,提高药物敏感性.