卵巢癌荷瘤裸鼠鼠双微体扩增基因siRNA分子探针显像研究

摘要

目的:探究放射性核素99 Tcm标记siRNA制备的鼠双微体扩增基因(murine double minute 2,MDM2)分子探针特性及卵巢癌荷瘤裸鼠显像效果.方法:将针对目的基因MDM2设计的siRNA1及对照组NC siRNA与99 Tcm通过HYNIC链接,合成分子探针99 Tcm-siRNA1、99 Tcm-NC siRNA,检测探针的标记率、放射性化学纯度、稳定性、生物活性、细胞摄取率.应用TurboFect体内转染试剂包裹99 Tcm-siRNA1、99 Tcm-NC siRNA探针,进行高表达MDM2的荷瘤裸鼠显像,测量不同时间点肿瘤/对侧肌肉组织(T/M)的放射性计数比值,并分析探针在小鼠体内分布的情况.结果:99Tcm-siRNA1、99Tcm-NC siRNA标记率分别为(62.17±3.16)％、(61.56±4.08)％,P>0.05(n=3),99Tcm-siRNA1的放化纯度为(94.5±3.8)％,经体外孵育2 h、4 h、6 h后分子探针并未发生明显解离,放化纯度均达到90％以上,稳定性好.经99 Tcm-siRNA1探针干扰后MDM2基因mRNA相对表达量为0.34±0.06(n=3),蛋白相对表达量为0.46±0.09(n=3).体外摄取试验中,SKOV3细胞在不同时间段对探针的摄取率持续上升,在体内显像中,99 Tcm-siRNA1探针组1 h、4 h、10 h各时间点的T/M比值分别为3.079±0.568、2.927±0.140、3.465±0.432(n=4),99 Tcm-NC siRNA组1 h、4 h、10 h各时间点的T/M比值分别为:1.472±0.272、1.272±0.165、1.804±0.165(n=4),99 Tcm-siRNA1不同时间点在肿瘤组织中分布均较高.结论:99 Tcm-siRNA1探针的标记方法、递呈方式可行,能够在肿瘤内特异性聚集,可为卵巢癌的诊断提供一种实时无创显像的方式.