miR-15b通过下调细胞因子诱导的杀伤细胞PD-1表达抑制宫颈癌细胞增殖

摘要

cqvip:目的:探讨微小RNA-15b(miR-15b)与程序性死亡蛋白-1(PD-1)在细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)抑制宫颈癌细胞增殖过程中的调控作用,并初步分析其中miR-15b与PD-1的可能作用机制。方法:采用传统方法培养CIK细胞,采用流式细胞仪检测CIK细胞免疫表型,CCK-8法检测CIK细胞对宫颈癌细胞(Si Ha)增殖的影响。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及蛋白印迹(WB)法检测CIK细胞共培养前后Si Ha细胞中miR-15b及PD-1表达水平。实验将CIK细胞共培养Si Ha细胞分为3组:空白对照组(未进行任何处理),NC组(加入miR-15b阴性对照质粒),si-miR-15b组(加入miR-15b siRNA)。采用qRTPCR与WB分别检测各组miR-15b及PD-1表达水平;CCK-8法检测各组Si Ha细胞增殖情况。采用WB法检测细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)及Ki67表达。结果:CIK细胞共培养组Si Ha细胞增殖抑制率显著高于单纯培养Si Ha细胞组(P <0. 05);CIK细胞共培养后Si Ha细胞中miR-15b表达水平显著高于单纯培养Si Ha细胞组(P <0. 05),而PD-1蛋白表达水平显著降低(P <0. 05);si-miR-15b组miR-15b表达水平、Si Ha细胞增殖抑制率均显著低于空白对照组、NC组(P <0. 05),而PD-1、PCNA、Ki67蛋白表达均显著升高(P <0. 05)。结论:miR-15b可能通过下调CIK细胞上PD-1表达进而抑制宫颈癌细胞增殖。