一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法

摘要

目的:寻找一种简易高效的大鼠原代肝细胞分离方法.方法:在Seglen两步胶原酶灌注法的基础上加以改进,按门静脉灌注法分离培养大鼠肝细胞,重复10次分离肝细胞实验,观察各项指标结果.采用胰酶、Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注,大鼠肝脏肝门部结构、肝上及肝下腔静脉封闭保留胶原酶消化分离获取肝细胞,经80目和200目的筛网依次过滤细胞后,细胞悬液分别以1 000、500、300 r/min离心各5 min以纯化肝细胞,以台盼蓝排染法测定细胞活性,HE染色鉴定肝细胞纯度.结果:平均每只成年Wistar雄性大鼠可以获得(1.53 ±0.31)×108个肝细胞,平均获得肝细胞活率可达到94.63％,平均获得肝细胞纯度为96.7％.结论:本实验介绍的方法简便易行,且肝细胞产量较高,活力好,纯度高,适宜在一般条件的实验室推广和应用.