细胞凋亡相关新基因Apr-3的一个转录剪接体的克隆、初步表达及纯化

摘要

目的:克隆Apr-3基因的一个转录剪接体,进行原核表达,并进行初步纯化.方法:培养HL-60细胞,提取HL-60细胞总RNA,应用RT-PCR获取Apr-3编码区cDNA序列的前366bp,将该cDNA与质粒pcDNA3.0连接,构建克隆载体,将其转化E.coli DH5α,进行测序,与GenBank中登录序列比对,结果正确后将该cDNA与质粒pET28a连接,构建原核表达载体,转化大肠杆菌,诱导表达获得Apr-3蛋白.结果:对测序结果进行序列分析,与GenBank中登录的Apr-3编码区完全一致.Apr-3融合蛋白主要以包涵体形式存在.结论:成功构建了Apr-3的原核表达载体,获得了较纯的Apr-3融合蛋白.