过表达MDA-7/IL-24蛋白的亚细胞定位

摘要

目的了解标签蛋白GFP的位置对过表达的MDA-7/IL-24融合蛋白亚细胞定位的影响.方法分别构建在MDA-7/IL-24 cDNA的5' 端和3' 端带有GFP- tag的重组表达质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3- mda-7/IL-24,瞬时转染猴胚肾Cos7细胞,48h后用Hoechst 33258染核,在荧光显微镜下观察GFP- MDA-7/IL-24融合蛋白在Cos7细胞的亚细胞分布.结果测序表明重组质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24构建正确;分别转染Cos7细胞后,在氨基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光均匀分布于胞浆和胞核,但在羧基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光则分布于核膜外侧和胞浆.结论 GFP-tag位置的不同对过表达融合蛋白MDA-7/IL-24的亚细胞定位有显著的影响.