CXCL4对非小细胞肺癌H460细胞顺铂耐药性的影响及其机制探讨

摘要

目的:探讨血小板因子4(CXCL4)对人非小细胞肺癌H460细胞顺铂耐药性的影响及其作用机制.方法:体外诱导法建立顺铂耐药的非小细胞肺癌细胞株H460/DDP,并鉴定其生物学特性.采用CCK-8法分别检测H460及H460/DDP对顺铂的耐药性.qRT-PCR及Western Blot检测亲本细胞株H460及顺铂耐药株H460/DDP中CXCL4的mRNA及蛋白表达水平.通过CCK-8法检测过表达或者敲低CXCL4后亲本细胞株H460或顺铂耐药株H460/DDP对顺铂的敏感性.最后利用Western Blot及qRT-PCR法探讨CXCL4抵抗非小细胞肺癌化疗敏感性的调控机制.结果:成功构建了非小细胞肺癌顺铂耐药株H460/DDP(H460/DDP IC50=55.005μg/ml),CCK-8结果提示顺铂耐药株H460/DDP与亲本细胞株H460细胞的增殖速度没有明显差异(P>0.05);顺铂耐药株H460/DDP中,CXCL4 mRNA及蛋白水平均显著增高(P<0.0001);在亲本细胞株H460中稳定过表达CXCL4能显著降低其对顺铂的敏感性(P<0.0001),而于顺铂耐药株H460/DDP中敲低CXCL4能显著增加H460/DDP对顺铂的敏感性(P<0.0001);Western Blot及qRT-PCR结果显示,CX-CL4能激活Wnt/β-catenin信号通路,促进下游基因MYC、CyclinD1、MMP-7、CDK4的表达.结论:CXCL4通过调控Wnt/β-catenin信号通路促进非小细胞肺癌对顺铂的耐药性.