miR-590通过靶向STAT3增强NK细胞对膀胱癌的免疫功能

摘要

目的:在膀胱癌患者外周血自然杀伤(NK)细胞中探究微小RNA(miRNA)-590的表达及其对NK细胞免疫功能的调控机制。方法:收集31例膀胱癌患者(Tumor组)和相同例数健康体检者(Normal组)的外周血为研究对象,使用NK细胞分离试剂盒从两组患者外周血单个核细胞中分离原代NK细胞。qRT-PCR实验检测miR-590和信号转导和转录激活因子3(STAT3)在原代NK细胞中的表达;Pearson相关系数分析膀胱癌患者NK细胞中miR-590与STAT3 mRNA表达的相关性;采用生物信息学技术分析miR-590与STAT3的靶向结合位点,双荧光素酶基因报告实验进行检测;将miR-590的模拟物(miR-590 mimics)、miR-590的抑制剂(miR-590 inhibitor)及阴性对照miR-NC转染入人NK细胞系NK-92中,并应用白介素-2(IL-2)活化细胞。按处理方式的不同将NK-92细胞分为:Control组、IL-2组、IL-2+miR-NC组、IL-2+miR-590 mimics组和IL-2+miR-590 inhibitor组。ELISA检测各组细胞上清液中干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)的含量,细胞毒性实验检测各组NK-92细胞对膀胱癌细胞系T24细胞的杀伤效应;为探究STAT3在miR-590介导的NK细胞免疫功能中的作用,将NK-92细胞又分为IL-2+miR-590 mimic+pcDNA-NC组和IL-2+miR-590 mimic+pcDNA-STAT3组。再次使用ELISA和细胞毒性实验进行检测各组NK-92细胞对IFN-γ和TNF-α的分泌以及对T24细胞的杀伤作用。结果:与Normal组相比,miR-590在Tumor组中的表达明显降低(P0.05)。此外,与IL-2+miR-NC组相比,IL-2+miR-590 mimics组和IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-NC组中NK-92分泌IFN-γ、TNF-α水平和对T24细胞的杀伤效应均明显升高(P0.05);与IL-2+miR-590 mimics组相比,IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-STAT3组中NK-92分泌IFN-γ、TNF-α水平和对T24细胞的杀伤效应均明显降低(P0.05)。结论:miR-590在膀胱癌外周血NK细胞中表达降低,上调其表达可通过靶向抑制STAT3来增强了NK细胞对肿瘤细胞免疫毒性作用。