LncRNA IQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴抑制孕激素耐药的子宫内膜癌细胞增殖

摘要

目的:探讨LncRNA IQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴对孕激素耐药的子宫内膜癌(EC)细胞增殖、凋亡的影响。方法:体外培养Ishikawa细胞,构建EC孕激素耐药细胞株Ishikawa/醋酸甲羟孕酮(MPA),MTT法验证Ishikawa/MPA细胞的耐药性;qRT-PCR法检测Ishikawa细胞和Ishikawa/MPA细胞中孕激素受体(PR)、LncRNA IQCH-AS1、miR-494-3p和ARID1A mRNA表达。双荧光素酶报告基因实验、RNA pull-down实验验证Ishikawa/MPA细胞中LncRNA IQCH-AS1、miR-494-3p和ARID1A间靶向关系。Ishikawa/MPA细胞分为Ad-NC组、Ad-IQCH-AS1组、Ad-IQCH-AS1+miR-NC组和Ad-IQCH-AS1+miR-494-3p组,qRT-PCR法检测LncRNA IQCH-AS1、miR-494-3p、ARID1AmRNA、PR mRNA表达;MTT检测细胞增殖活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测ARID1A、PR、CyclinD1、CDK4、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达。裸鼠成瘤实验观察LncRNA IQCH-AS1对Ishikawa/MPA细胞裸鼠移植瘤生长和MPA耐药性的影响。结果:本研究构建的Ishikawa/MPA细胞耐药指数为4.33。Ishikawa/MPA细胞中PR mRNA、LncRNA IQCH-AS1和ARID1A mRNA低表达,而miR-494-3p高表达(P<0.05)。经验证,Ishikawa/MPA细胞中miR-494-3p与LncRNA IQCH-AS1、ARID1A均存在靶向关系。Ishikawa/MPA细胞中过表达LncRNA IQCH-AS1能够下调miR-494-3p表达,同时上调ARID1A、PR mRNA和蛋白表达,降低细胞存活率和CyclinD1、CDK4蛋白表达,提高细胞凋亡率和cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达(P<0.05);而过表达miR-494-3p可减弱过表达LncRNA IQCH-AS1对ARID1A、PR表达以及细胞增殖、凋亡的影响。此外,过表达LncRNA IQCH-AS1可抑制Ishikawa/MPA细胞的裸鼠移植瘤生长,并降低MPA耐药性。结论:LncRNA IQCH-AS1调节miR-494-3p/ARID1A轴抑制孕激素耐药的EC细胞增殖,并诱导其凋亡。