C1q样蛋白4通过PI3K/Akt信号通路调节乳腺癌干细胞特性和上皮间质转化

摘要

目的:初步探讨C1q样蛋白4(C1ql4)对乳腺癌干细胞特性及上皮间质转化的影响。方法:采用siRNA干扰技术,下调细胞株BT549中C1ql4的表达,采用RT-qPCR法及Western blot法验证C1ql4的沉默,并将后续实验分为空白组、对照组(si-NC组)及C1ql4沉默组(si-C1ql4组)。采用RT-qPCR法及Western blot法分别对各组细胞干性相关指标(CD44、Nanog、OCT4)及EMT相关指标(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin)的mRNA和蛋白表达情况进行检测。利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况、CD44^(+)CD24^(-/low)细胞含量变化,成球试验比较各组细胞成球能力,Transwell小室实验比较各组细胞的迁移能力。Western blot法检测信号通路蛋白表达水平,探索C1ql4影响乳腺癌细胞干性及对上皮间质转化可能的机制。结果:下调C1ql4表达后,si-C1ql4组CD44、Nanog、OCT4、Vimentin及N-cadherin的mRNA和蛋白表达量,乳腺癌干细胞含量、迁移能力及成球能力均低于空白组和si-NC组;E-cadherin mRNA和蛋白表达量、细胞凋亡率均高于其他两组;PI3K和Akt的蛋白表达水平及磷酸化水平也明显低于空白组和si-NC组,差异均具有统计学意义(P<0.05),而空白组和si-NC组之间上述指标的差异无统计学意义。结论:C1ql4可促进乳腺癌细胞干性表达及乳腺癌细胞的上皮间质转化,还可增强乳腺癌细胞成球、迁移能力,抑制瘤细胞凋亡,且作用机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。